### 背景介绍
谷胱甘肽(GSH)是一种重要的细胞内抗氧化剂,其浓度直接反映了肿瘤细胞的氧化还原状态。在肺癌细胞中,高水平的GSH常常用来抵抗放疗和化疗产生的活性氧(ROS),这可能导致治疗效果不佳。作为谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的辅因子,GSH能够抑制铁死亡,而其消耗会使GPX4失去活性,进而促进铁死亡。因此,GSH水平的变化被视为铁死亡的重要标志。动态监测GSH可以评估治疗对氧化应激和铁死亡途径的激活情况。此外,GSH的检测也能够验证GSH响应性药物的释放效率,从而实现针对肿瘤的特异性激活。
### 谷胱甘肽在肺癌治疗中的应用
2025年5月8日,复旦大学药学院的陈依婷博士及其团队在《Journal of Nanobiotechnology》上发表了一项题为“Inhalable biomimetic polyunsaturated fatty acid-based nanoreactors for peroxynitrite augmented ferroptosis potentiate radiotherapy in lung cancer”的研究。研究团队设计了一种基于多不饱和脂肪酸(PUFA)的纳米反应器DHA-N@M,通过吸入方式作用于肺部肿瘤。该纳米反应器由巨噬细胞膜包裹的DHA-SNO(一种GSH响应性释放NO的PUFA衍生物)构成,具有多重优势,包括肿瘤靶向性和GSH响应特性。实验结果表明,DHA-N@M可以显著提高药物在肺肿瘤中的蓄积,效果优于静脉注射。其作用机制是通过消耗GSH、释放NO并生成ONOO⁻来诱导肿瘤细胞的铁死亡,与放疗联用可协同增强抗肿瘤疗效。在肺癌原位模型中,DHA-N@M联合放疗呈现出9391%的肿瘤抑制率,且安全性良好。这项研究为肺癌的治疗提供了一种新型的吸入式纳米药物递送系统,通过靶向肿瘤微环境并增强铁死亡,显著提升了放疗效果,具有重要的临床转化潜力。
### 谷胱甘肽检测试剂盒(abs580006)的使用方法
一、试剂盒组分
- 96孔微孔板 1 plate
- Assay Buffer 30 mL x 4,4℃
- Reaction Buffer 8 mL x 1,4℃
- Dye Reagent Powder x 1,4℃,避光保存
- Diluent 4 mL x 1,4℃
- Standard Powder x 1,4℃,避光保存
- Technical Manual 1 Manual
二、操作步骤
1. 材料和试剂准备
自备材料:酶标仪、蒸馏水、移液器与枪头、研钵、离心机、计时器、湿冰等。准备标准品时,使用前将0.65 mL蒸馏水加入管中,混匀至完全溶解;然后取0.05 mL溶液加入0.95 mL蒸馏水中混合均匀,获得浓度为0.5 mmol/L的标准品溶液,于4℃储存。
2. 样本处理
(1) 细胞/细菌样本:将细胞/细菌(5×106)收集到离心管中,离心后去掉上清液,加入1 mL Assay buffer,超声处理后在4℃下以8000 g离心10分钟,将上清液转移至新离心管中,湿冰储存待检测。
(2) 组织样本:称取0.1 g组织,加入1 mL Assay buffer,湿冰匀浆,4℃以8000 g离心10分钟,将上清液转移至新离心管中,湿冰储存待检测。
(3) 血清/血浆样本:可直接检测。
3. 上样及检测
在上样前将所有试剂加热至37℃,然后按照下表加样。
试剂 | 空白对照孔 | 标准品孔 | 样品孔 |
---|---|---|---|
Sample | -- | 80μL | 80μL |
Standard | 80μL | -- | -- |
Distilled water | 80μL | -- | -- |
Reaction Buffer | 80μL | 80μL | 80μL |
Dye Reagent | 40μL | 40μL | 40μL |
混合均匀后在37℃孵育10分钟,测量并记录412 nm处的吸光度。
4. 标准曲线
标准曲线仅供参考,每次实验需重新绘制。检测范围为0.01 mmol/L - 0.5 mmol/L。
### 常见问题解答
Q1:试剂盒中的96孔微孔板只有一个,不够实验使用怎么办?
A1:该试剂盒中的96孔板是免费提供的,后续实验可以使用常规的96孔板代替。
Q2:试剂盒操作说明书中既有标准曲线法又有公式法,我应该选择哪种计算方式?
A2:两种方式任选其一,建议使用标准曲线法以确保结果的准确性。
Q3:反应过程中出现沉淀,应该如何处理?
A3:沉淀多由蛋白质浓度过高引起,建议离心处理后取上清进行检测。
Q4:仪器无相应检测波长怎么办?
A4:推荐的检测波长如仪器没有,可以选择相近波长,一般在±10 nm范围内是可行的。
参考文献:
[1] Chen Y, Huang X, Hu R, et al. Inhalable biomimetic polyunsaturated fatty acid-based nanoreactors for peroxynitrite-augmented ferroptosis potentiate radiotherapy in lung cancer. J Nanobiotechnology 2025; 23(1):338. doi:10.1186/s12951-025-03409-8
### 关于尊龙凯时
尊龙凯时致力于提供各类生物医疗相关产品,包括谷胱甘肽系列试剂盒等。我们不断推动科研进步,为医疗健康贡献力量。